吡咯烷酮的pH值和温度对PVP水溶液的影响,起到细胞保种的作用。适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失,未交联的PVP溶液没有特殊的触变性,除非浓度高时才会有触变性,并显示很短的松驰时间。细胞冻存经验谈:选对冻存工具才是王道,细胞冻存是将细胞储存在低温环境中,减少细胞代谢,实现长期储存的一种技术。(吡咯烷酮)在大多数细胞系中,PVP的增稠性能与其相对分子质量密切相关,在给定浓度的条件下,相对分子质量越大,其黏度也越大。细胞会随着衰老和演化不断的积累改变,造成表型和基因型的“培养漂移”,正确且成功的冻存对于细胞的长久应用起着重要的作用。
在冻存过程中,因而,正确的培养和温和的细胞收集,在冻存前,细胞应保持 佳的生长状态(处于对数期或指数期),理想情况下,培养基应在收获前24h更换。建议对培养物进行微生物污染物,特别是支原体,确保细胞没有污染。在细胞的收集过程中,实验操作要尽可能的温和,避免细胞受损。(吡咯烷酮)适当的低温保护剂,目前,细胞冻存 常用的技术是液氮冷冻保存法,主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞,减少在冷冻过程中对细胞的损害。细胞在不加保护剂的情况下直接冻存,细胞内外的水分会很快形成冰晶,从而引起一系列不良反应。
聚乙烯基吡咯烷酮、乙二醇、甲醇和甲基乙酰胺等都是低温保护剂。在细胞冻存中 常见的是二甲基亚砜(DMSO)和甘油,这两种物质分子量小,溶解度大,易穿透细胞,可以使冰点下降,提高细胞膜对水的通透性,关键在于对细胞性。(吡咯烷酮)DMSO通常浓度为5 - 10% (v/v), 佳浓度随细胞系的不同而不同。甘油在冷冻介质中的 终浓度为5 - 15%,同样, 佳浓度取决于细胞系。为了提高较难保存的细胞的存活率,冻存时可以选择增加保存液中的血清浓度。想要冻存细胞更快更稳,细胞冻存液会是不错的选择,无需配制,直接在细胞中加入适量的冻存液即可,操作简单,就能拥有高活率的细胞。